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NK培养基过程有哪些需要注意的?

2023-08-10

行业热点

大量的临床研究结果表明,NK细胞具有优秀的抗肿瘤作用的同时也具备着良好的安全性,其临床治疗潜力也同时在行业中得到了更广泛的关注,同时也使更多的人关注于NK培养基

在进行NK细胞的培养实验时,影响最终实验结果的因素非常多。为了帮助客户解决问题,金沙集团根据以往经验,为大家整理了实验过程中最容易被大家忽视但却极易影响实验结果的四个关键点,希望大家实验路上能够顺风顺水!

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一、采血环节需注意:

1)为了避免抗凝剂占比过高影响自体血浆的使用,应使脐血中的抗凝剂占比低于30%。

如用采血袋采集血样,建议使用100mL容量的采血袋。如果采血时用200mL采血袋,建议取出14mL 抗凝剂。

2)因为EDTA会影响NK细胞的激活与扩增,采集血样时禁止使用 EDTA 抗凝的真空采样管,可以选用肝素钠抗凝的真空采血管。

二、培养基配制及补液:

1)激活培养基:200mL基础+200uL YC00C。第0天配。D0-D5使用。

扩增培养基:1.8L基础+1.8mL YC005。第7天配。D7开始使用。

2)培养基A:基础培养基+YC005,第0天配。D0及D9后使用。

培养基B:基础培养基+YC005+YC00C,第3天配。D3-D9使用。

3)每次补液时添加的培养基需预温,用多少取多少,禁止将整瓶培养基预温、禁止反复预温。

4)培养基现配现用,配成完全培养基后4°保存。

三、培养期间需注意:

1)使用TC处理水平较高的贴壁细胞培养瓶,2L体系套装建议以2个T25瓶起始培养。

2)尽可能使用大体积的培养袋,促进细胞间的气体交换,防止代谢废物过多影响细胞增殖。

如采用1L培养体系,推荐使用2L培养袋;采用2L培养体系,推荐每个1L体系使用1.8L培养袋。

3)刚入袋时,一般细胞培养袋大而细胞液体积小,建议将培养袋对折使用(d7),选择合适的底面积培养。

4)外周血的推荐接种密度为1.5-2E6cells/mL。

脐血UCBMC的推荐接种密度为2.5-3E6cells/mL。

四、避免细胞机械损伤:

1)细胞接种后,第1-3天会形成悬浮细胞小团,第3-5天绝大部分悬浮细胞团贴壁,不可将其晃起,第5-7天贴壁的细胞团变大、变多,这些都是正常的细胞形态。

2)培养前期一定不要吹打细胞团(D0-D5),以减少细胞机械损伤。