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NK细胞培养的高效方法

2023-08-07

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目前的NK细胞培养技术主要有两种,一种是以肿瘤细胞为培养基质的饲养细胞培养法;另一种是以抗体诱导的纯因子培养法。前者对NK的扩增倍数和培养纯度效果要稍好一些,但是存在肿瘤细胞的残留问题,有一定风险;而纯因子法培养的NK细胞根据不同诱导抗体,培养出的NK数量和纯度大不相同,即使使用同一种诱导培养方法,对不同个体的PBMC诱导培养效果也参差不齐,没有一套绝对稳定的培养方案。

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经过近几年国内外研究发现,HSP70、HER2、EGFR等几个靶向受体对NK细胞的诱导效率相对较高,IL2/12/15/18/21等细胞因子能大幅度增加NK细胞的数量和活性,其中IL12能提高记忆性NK细胞的形成、IL2/15/21能有效提高NK细胞的增殖数量、IL18能增强NK细胞的细胞毒性。

其中自体NK细胞体外培养目前相对高效的方法是,以HER2单抗为诱导因子,IL2/12/15/18为活化因子的培养体系,单次采血50ml,能有效培养出70-100亿细胞单位的制剂,大幅提高临床使用的频率和剂量。具体实施方案为:1-3mg/ml曲妥珠单抗(HER2)37℃包被培养瓶(3-5ml/T75培养瓶)1-2小时,接种4千万-6千万PBMC(接种密度维持在150万-300万/ml),第一周加入含1000-2000IU/ml IL2、20-40ng/ml IL12、60-100ng/ml IL15、30-60ng/ml IL18和10-15%自体血清的免疫细胞培养基培养,每隔2-3天翻倍补加培养基,第7天进行细胞转袋,转袋后加入含1000-2000IU/ml IL2和20-50ng/ml IL21的免疫细胞培养基培养,每隔2天翻倍补加培养基,第10天之后每隔2天按1.5倍补加培养基,培养15-16天后收集细胞。